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第五章 分光光度法
第一节 可见—紫外分光光度法
掌握可见--紫外分光光度法的基本原理和测定方法。掌握可见—紫外分光光度法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。熟悉仪器的校正和检定方法;紫外吸收光谱与物质结构的关系。了解紫外分光光度计的基本结构。
一、基本原理
波长200～400nm范围称为紫外光区，400～760nm称为可见光区。物质吸收紫外和可见光区电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。
1.光源：紫外光区通常采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯。
2.吸收池：玻璃池适用于370nm以上的可见光区，石英池适用于紫外、可见光区，通常仅在紫外光区使用。
三、紫外吸收光谱与物质结构的关系：紫外—可见吸收光谱属分子吸收光谱，是由分子的外层价电子跃迁产生的，也称电子光谱。它与原子光谱的窄吸收带不同。每种电子能级的跃迁会伴随若干振动和转动能级的跃迁，使分子光谱呈现比原子光谱复杂得多的宽带吸收。
当分子吸收紫外—可见区的辐射后，产生价电子跃迁。这种跃迁有三种形式：
(1)形成单键的σ电子跃迁。(2)形成双键的π电子跃迁。 (3)未成键的n电子跃迁。
通常，未成键的孤对电子较易激发，成键电子中π电子较相应的σ电子具有较高的能量，反键电子则相反。故简单分子中n→π* 跃迁需能量最小，吸收带出现在长波方向;n→σ*及n→π* 跃迁的吸收带出现在较短波段;σ→σ*跃迁吸收带则出现在远紫外区。
例题：物质分子吸收紫外光后，电子跃迁的类型为：A. n→σ* B. n→π* C. π→π* D. σ→σ* E .σ→π* 答案ABCD
四、吸收度的测定方法
1.对溶剂的要求：能充分溶解样品，与样品无相互作用，挥发性小，在测定波长处的吸收要符合要求。
2.空白对照实验：将配制溶液用溶剂(空白溶液)装入参比池里，调节仪器，使吸收度为0，去除溶剂和容器吸收、光散射。反射的影响。
3.测定波长确证：为提高测定方法灵敏度，减少测定误差，吸收度一般在λmax处测定。
4.供试品溶液浓度：使吸收度在0.3～0.7范围内。
5.仪器的狭缝宽度：以减少狭缝宽度时，供试品溶液吸收度不再增加为准。
五、应用
1.鉴别：(1)对比吸收光谱特征参数：核对供试品溶液λmax、 、A是否符合规定。可同时用几个峰位作为鉴别依据
(2)比较吸收度比值的一致性：吸收峰较多时，规定几个波长处吸收度比值作为鉴定标准
(3)对比吸收光谱一致性
2.杂质检查
药物在紫外-可见光区有明显吸收，而杂质吸收弱;或杂质有明显吸收而药物无吸收，可通过控制吸收度限度来控制杂质量。
3.含量测定
(1)对照品比较法：供试品溶液和对照品溶液浓度及测定条件应尽可能一致
(2)吸收系数法：需对仪器进行严格校正和检定
(3)计算分光光度法：通过数学处理消除样品中干扰组分的干扰
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